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                  Elisa實(shí)驗(yàn)| 雙抗體夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)操作
                  更新時(shí)間:2023-09-22瀏覽:791次

                    Elisa實(shí)驗(yàn)| 雙抗體夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)操作


                    一、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋及樣品準(zhǔn)備

                    樣本離心4℃,1000Xg,5min

                    標(biāo)準(zhǔn)品離心4℃,10000Xg,1min

                    1mL稀釋液溶解標(biāo)準(zhǔn)品,靜置1-2min,取7支空EP管,每管加入500μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液,靜置后標(biāo)準(zhǔn)品混勻,將液體離心至底部(800Xg,1min)

                    取同體積標(biāo)準(zhǔn)品原液稀釋?zhuān)瑴u旋混勻,依次倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,最后一管為空白

                    二、酶標(biāo)板拆分

                    可按照實(shí)驗(yàn)需求拆裝板條,讓板條松動(dòng)并輕推底部,拆下板條防止在備用板框上,剩余板條防至鋁箔袋,封口存放。

                    三、標(biāo)準(zhǔn)品及樣本點(diǎn)樣

                    由低到高濃度,每孔100μL,懸空加入(建議均設(shè)置復(fù)孔)

                    處理后樣品取上清溶液,懸空,每孔100μL,腹膜后標(biāo)記。提前預(yù)熱,注意溫度,37℃孵育90min。


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                    四、生物s化抗體工作液制備

                    取適量生物素化抗體稀釋液,加入濃縮液,稀釋100倍后,顛倒混勻20次,待用。

                    取出酶標(biāo)板,勿觸摸板條底部,甩盡孔內(nèi)液體后,拍干。將工作液倒入加樣槽,懸空垂直加入,100μL/孔,腹膜后標(biāo)記,37℃孵育60min。

                    五、1x洗液配制

                    根據(jù)需求取雙蒸水適量,取25x濃縮洗滌液適量,加入燒杯,磁力攪拌器混勻5-10min。

                    六、濃縮HRP酶結(jié)合物工作液制備

                    取適量HRP酶結(jié)合物稀釋液,加入濃縮液,稀釋100倍后,顛倒混勻20次,備用

                    取出酶標(biāo)板,勿觸摸板條底部。輕撕覆膜,避免液體濺出。參數(shù)設(shè)定:洗滌次數(shù)3次、洗板條數(shù)12條、洗滌液量350μL/孔、震板5s。拍干液體,更換吸水紙。將工作液倒入加樣槽,懸空垂直加入,100μL/孔,腹膜后標(biāo)記,37℃孵育30min。

                    七、顯色

                    平衡取出酶標(biāo)板勿觸摸板條底部,輕撕覆膜,避免液體濺出,參數(shù)設(shè)定。洗滌次數(shù)5從,洗板條數(shù)12條,洗滌液量350μL/孔,震板5s。拍干液體,更換吸水紙。

                    將底物溶液倒入加樣槽,懸空垂直加入,90μL/孔,腹膜后標(biāo)記,37℃孵育15-30min。

                    八、終止反應(yīng)

                    平衡取出酶標(biāo)板,切勿觸摸板條底部,顯色后前四孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色剃度。輕撕覆膜,避免液體濺出。懸空垂直加入,50μL/孔,加入終止液時(shí)可看到藍(lán)色立轉(zhuǎn)為黃色。

                    九、數(shù)據(jù)處理

                    輕輕擦拭板底,放入酶標(biāo)儀中,上機(jī)操作。

                    ELISA實(shí)驗(yàn) 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿(mǎn)足客戶(hù)的需求。與客戶(hù)的共贏(yíng),是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來(lái)。


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